ALBERT

Abstract: Résumé Afin de sélectionner des pommes de terre et d’autres espèces deSolanum ‘tubérifères’ résistantes au viroïde du ‘Spindle tuber’ (PSTV) (inconnu au Royaume Uni), on a utilisé une souche différente de PSTV isolée à partir deSolanum commersonii Dun. pour surinfecter des plantes de tomate, dans un test de protection croisée de manière à détecter l’effet de protection apporté par des souches peu virulentes. Les symptômes varient avec les conditions-de culture, et les plantes de tomate doivent recevoir une alimentation correcte. Pour la variété Sheyenne, inoculée au stade 2–3 feuilles et maintenue à 31°C, des symptômes sévères apparaissent en 2 semaines si la lumière est suffisante (une forte luminosité correspond à une radiation photosynthétiquement active (PAR), de 55 W m−2 ou à 550 μE m−2s−1, pendant 17 à 18 h par jour: tab. 1.) Les symptômes correspondent à une rugosité, une épinastie et une chlorose au sommet de la plante, on a également un rabougrissement caractéristique. Une faible intensité lumineuse de 25W m−2 PAR, retarde l’ expression des symptômes à 31°C, et le rabougrissement est contrecarré par un étiolement. La haute température ne favorise pas la nécrose des nervures. Une température modérée de 23°C, à éclairement faible ou plus élevé donne des symptômes plus tardifs et moins évidents (tab. 1 et 3), mais ces facteurs tendent à favoriser la nécrose. Une chute de température à 15°C, chaque nuit, empêche l’expression des symptômes pour des plantes placées à 23°C pendant 24 jours, et soumises à une intensité lumineuse élevée ou faible (tab. 1). Des plantes initialement cultivées à des températures modérées ou élevées, en luminosité correcte, et soumises ensuite à un régime de faible luminosité et de température modérée, respectivement 23°C le jour et 15 °C la nuit, extériorisent des nécroses sévères si la contamination a été réussie (expérimentations qui ont été résumées dans le tableau 2). L’infection semble prendre plus de temps pour s’installer à 23°C, qu’à température plus élevée (tableau 2). Des mesures du pouvoir infectieux d’homogenats de plantes entières, considérées comme étant la dilution maximale de chaque homogenat infectieux sur au moins 2/3 des plantes de tomate (tab. 3), indiquent que la concentration en viroïde augmente rapidement à 31 °C. Cela peut être corrélé avec l’apparition précoce des symptômes chaque fois que la lumière est suffisante. Une faible intensité lumineuse et une intensité lumineuse moyenne (35 W m−2) bien que cela retarde l’expression du symptôme, ne semble pas réduire significativement les concentrations en viroïde à 31°C. La concentration continue à augmenter durant une période de 2 à 3 semaines à 23°C ou 31°C, même quand l’intensité lumineuse de 17 à 18 h chaque jour est juste capable de maintenir la croissance (tableau 3). Dans la discussion, les auteurs émettent l’hypothèse que les périodes d’éclairement plus longueus et l’intensité lumineuse plus élevée peuvent se traduire par une augmentation de la synthèse viroïde; un éclairement faible pendant 17 à 18 h chaque jour ne limitera pas de manière critique la synthèse. On suppose que les nécroses dépendant de la température et induites par le viroïde, peuvent être identiques aux nécroses induites par les virus ou par d’autre infection. Des observations non publiées sur la fluorescence en lumière UV, autour des lésions surScopolia sinensis Hemsl. contaminé par PSTV, sont citées pour défendre ce point de vue. Dans le cadre d’un nouveau procédé de détection du PSTV, les variétés de tomate Sheyenne et Ailsa Craig ont été utilisées afin d’augmenter la concentration en viroïde.

Abstract: Résumé Une méthode est décrite pour tester 100 échantillons de feuilles de pomme de terre en une seule fois dans la détection du viroïde de la maladie des tubercules en fuseaux de la pomme de terre (d'après Morris & Smith, 1977, avec de légères modifications). Les tests sont destinés à protéger les familles d'élites et les programmes d'hybridation de l'infection viroïde provenant d'origines étrangères. Un extrait de feuilles de pommes de terre infectées est inoculé à des tomates. Ces dernières sont cultivées pendant 35 jours en serre, à une température supérieure à 25°C, avec une photopériode de 18 heures; l'acide nucléique du viroïde est isolé de ces dernières (fig. 1) et examiné à l'aide de l'électrophorèse en gel de polyacrylamide (PAGE). Les expériences ont été faites avec trois souches de viroïdes. Une souche cause habituellement des symptômes sévères sur les variétés-tests de tomate; les deux autres provoquent des symptômes modérés. Les souches ont été isolées de tubercules importés deSolanum ssp., respectivementS. commersonii Dun,S. gourlayi Hawkes etS. tuberosum L. Les isolats issus de tomates ont servi d'inoculum à d'autres tomates après dilution dujus de 1000 fois, et le viroïde a été détecté chez les tomates infectées de la variété Sheyenne par PAGE après 35 jours de culture à 22 ou 30°C. Il a été détecté chez la variété Ailsa Craig après 35 jours de culture à 22°C (tableau 1). (Cette dernière n'a pas été testée à 30°C.) La photopériode était de 16 heures avec une intensité minimum de 35W (350μE) m−2 en radiation photosynthétiquement active (PAR) donnée par des tubes fluorescents placés dans la chambre de culture. Les tissus foliaires des hôtes respectifs des deux souches modérées ont été testés après deux mois de conservation à −18°C: le viroïde d'une foliole infectée des 100 échantillons a rapidement été détecté par la méthode tomate/PAGE. De plus, les extraits d'acide nucléique de ces 100 folioles dilués 10 ou 100 fois, ou bien additionnés d'extraits d'acides nucléiques provenant d'une autre extraction de 20g de tissus non-infectés diluée au 1/10, permettaient la transmission à la variété Ailsa Craig. Dans ces expériences, les pieds de tomate ont été cultivés en serre à la température diurne de 22–25°C et à la température nocturne minimum de 18°C avec un éclairement complémentaire de 18 heures par jour. Le viroïde a été détecté dans toutes les plantes après 28 jours. A la discussion, il est suggéré que la quantité minimum de tissus de feuilles à prélever par plante est de 0,1g et que le nombre maximum de plantes par test est de 100. Cela permet d'augmenter la confiance dans les résultats négatifs. Morris & Smith (1977) proposent un prélèvement minimum de 0,05g pour chacune des 250 plantes du test effectué dans les terrains de culture canadiens. Parce que la synthèse du viroïde dépend de la température de croissance des pommes de terre (Schumann, 1980) un échantillon de 0,2g pourrait être prélevé sur 50 plantes lorsque celles-ci sont cultivées en sols froids. On pense qu'il est probablement préférable de concentrer l'inoculum après extraction plutôt que d'utiliser beaucoup de tissus foliaires pour l'extraction. La possibilité d'extraction avec la quantité minimum de tissu de notre équipement, pour une seule utilisation, est de 2g. La synthèse du viroïde dans la tomate et sa détection par PAGE paraissent être en bonne relation. Des températures aussi basses que 22°C sont adéquat pour la croissance des tomates inoculées (tableau 1; Harris & Browning, 1980). Avec une photopériode de 17–18 heures, une intensité lumineuse plus basse ne gêne vraisemblablement pas de façon critique la synthèse du viroïde (Harris & Browning, 1980, travaillent avec la souche sévère à 25W m−2 PAR). Une mince bande de l'ARN de l'hôte, appelée 9S (fig. 1) est l'indice d'une bonne extraction et d'une électrophorèse convenable. La position de la bande correspondant au viroïde peut être convenablement estimée en se référant aux bandes 9S et 5S de l'ARN de l'hôte. Un résultat négatif est constaté quand la bande 9S est présente mais qu'il n'existe pas dans la partie moyenne du diagramme de bande signalant la présence du viroïde. Des contrôles positifs ne sont donc pas nécessaires. Un résultat positif peut être confirmé par une répétition du test PAGE de la tomate accompagné de la transmission à des plantes-tests (tomate).