ISSN:
1618-2650
Keywords:
Best. von Enzym-Coenzym-Dissoziationskonstanten
;
Spektralphotometrie
;
Verdrängung von Tetrajodfluorescein aus den Komplexen
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Chemistry and Pharmacology
Description / Table of Contents:
Zusammenfassung Die Bindung des Farbstoffs Tetrajodfluorescein an verschiedene Dehydrogenasen wird herangezogen, um die Dissoziationskonstanten von Enzym-Coenzym-Komplexen zu bestimmen, da der Farbstoff und pyridinhaltige Coenzyme um die gleiche Bindungsstelle konkurrieren. Durch Zugabe der interessierenden Coenzyme läßt sich somit der Farbstoff aus seiner Bindungsstelle am Enzym verdrängen. Die Bindung und die Verdrängung des Farbstoffs läßt sich durch Differenzspektrophotometrie untersuchen, wobei die Eigenschaften der Enzym-Farbstoff- und der Enzym-Coenzym-Komplexe aus den Differenzspektren entnehmbar sind. Dabei ergibt sich folgender Zusammenhang:K D,EL =K · K D,EF , d.h. die gesuchte Dissoziationskonstante des Enzym-Coenzym-Komplexes ist das Produkt aus der Dissoziationskonstanten des Enzym-Farbstoff-Komplexes und der „Kopplungskonstanten“K zwischen Farbstoff und Coenzym bei der Verdrängungsreaktion. Um Anwendbarkeit und Genauigkeit dieser Methodik zu zeigen, werden die Dissoziationskonstanten von NAD+ bzw. NADH an Alkoholdehydrogenase aus Hefe und Pferdeleber und an Lactatdehydrogenase aus Rinder- und Kaninchenmuskel bestimmt und mit den bekannten Werten verglichen.
Notes:
Abstract Tetraiodofluorescein (Erythrosin B) is bound to several dehydrogenases. This binding becomes measureable by an absorption difference spectrum in the wavelength range between 500 nm and 600 nm. Apparently the dye is bound to the adenosine moiety of the active site of nicotineamide dependent dehydrogenases. Thus, displacement of the dye should occur by several coenzymes and nucleotides and hence gives valuable information about the binding properties of these sites. The dissociation constant of enzyme-coenzyme complexes is given byK D,EL =K · K D,EF whereK D,EF is the dissociation constant of the enzyme-dye complex andK is the equilibrium constant between dye and coenzyme during the displacements. The method described is used to determine the dissociation constants of NAD+ and NADH on alcoholdehydrogenase from yeast and horse liver and on lactate dehydrogenase from beef and rabbit sceletal muscle. The results are compared with known values.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF01155595
