ISSN:
1432-0827
Keywords:
Osteoclasts
;
Enzyme
;
Parathyroid
;
Microdissection
;
Ultrastructure
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Biology
,
Medicine
,
Physics
Description / Table of Contents:
Résumé Une nouvelle méthode d'isolement d'ostéoclastes est mise au point pour des analyses biochimiques et de microscopie électronique. Pour isoler les cellules par microdissection, des empreintes d'os métaphysaire sont utilisées. Cette méthode, supérieure aux coupes d'os, permet une meilleure préservation cytologique et enzymatique et permet d'obtenir des cellules totales plus faciles à manipuler, avec des résultats plus reproductibles. Par analyse planimètrique de cellules isolées, colorées histochimiquement, il apparait que les ostéoclastes constituent plus de 90% de la masse de l'échantillon. Les concentrations de la phosphatase acide et de certaines enzymes, liées au nucléotide pyridinique, entrant dans le métabolisme de l'acide citrique, sont déterminées dans des échantillons d'ostéoclastes, pesant de 0,2 à 2,0 μg, isolés à partir de rats normaux et parathyroidectomisés. L'activité en aconitase, mesurée en direction de la transformation de citrate en isocitrate, est de 0,5–0,8 M/Kd/H, la plus faible des activités étudiées. Les activités en GDH et NADP-ICDH sont 5 à 10 fois supérieures que celle de l'aconitase, mais seulement un dixième à un tiers de celle de la phosphatase acide, de la déshydrogénase lactique ou malique.
Abstract:
Zusammenfassung Es wird eine neue Technik beschrieben, welche die Isolierung von Osteoklasten für biochemische und elektronenmikroskopische Untersuchungen ermöglicht. Als Ausgangsmaterial zur Zellisolierung wurden Abstriche von Metaphysenknochen benützt. Die Verwendung von Abstrichen bietet gegenüber Knochenschnitten wichtige Vorteile, wie z.B. eine bessere Erhaltung der cytologischen und enzymatischen Eigenschaften sowie die Gewinnung von unverletzten Zellen, welche leichter verarbeitet werden können und besser reproduzierbare Daten ergeben. Durch planimetrische Analyse der histochemisch gefärbten Ausstriche von isolierten Zellen konnte nachgewiesen werden, daß die Osteoklasten über 90% des gesamten Probenmaterials ausmachen. Die Mengen verschiedener Enzyme, welche an Pyridinnukleotid gebunden und am Citronensäuremetabolismus beteiligt sind, sowie der sauren Phosphatase wurden in Osteoklastenproben bestimmt, welche ein Gewicht von 0,2–2,0 μg hatten und aus Knochen von normalen und mit Parathyroidextrakten behandelten Ratten isoliert worden waren. Die Aktivität der Aconitase, welche in der Richtung von Citrat zu Isocitrat gemessen wurde, war mit 0,5–0,8 M/Kd/H die niedrigste aller untersuchten Aktivitäten. Die Aktivitäten der GDH und der NADP-ICDH waren 5–10mal höher als jene der Aconitase, entsprachen jedoch nur einem Zehntel bis einem Drittel derjenigen der sauren Phosphatase, der Laktat- oder der Malatdehydrogenase.
Notes:
Abstract A new method is described by which osteoclasts can be isolated for biochemical and electron microscopic analyses. As a source of cells for isolation by microdissection, imprints of metaphyseal bone were used. The use of imprints provides important advantages over bone sections, including a higher degree of cytologic and enzymatic preservation, and the delivery of whole cells which are more readily manipulated and which yield data that are more readily reproduced. By planimetric analysis of the histochemically-stained isolated cell samples, it was shown that osteoclasts represent over 90% of the sample mass. The levels of several of the pyridine nucleotide-linked enzymes involved in citric acid metabolism, as well as acid phosphatase, were determined in osteoclast samples weighing 0.2 to 2.0 μg isolated from normal and parathyroid-treated rats. Aconitase activity measured in the direction of citrate to isocitrate was 0.5–0.8 M/Kd/H, the lowest of the activities studied. The activities of GDH and NADP-ICDH were 5 to 10 times higher than that of aconitase but only a tenth to a third that of acid phosphatase, lactic or malic dehydrogenase.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF02061969
