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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 277-287 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Bone ; Enamel ; Hydroxyapatite ; X-ray Diffraction
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé Une étude de microscopie électronique est réalisée pour déterminer si l'élargissement des raies des diagrammes de diffraction aux rayons X, observée après divers procédés de préparation, est liée à la fragmentation des cristaux ou à l'espèce cristalline considérée. Les échantillons d'émail, obtenus par meulage à l'aide de diamants ou de fraises de carbones, tournant à grandes ou à petites vitesses, contiennent de grandes quantités d'émail finement pulvérisé, des quantités relativement grandes de cristaux individuels disséminés et relativement peu de particules (habituellement inférieures à 5 microns), contenant un nombre variable de cristaux intacts. Des échantillons témoins, obtenus par meulage à l'aide de billes, contiennent des cristaux intacts de 5–10 microns. Un meulage prolongé à l'aide de billes donne des quantités importantes de produits fins (inférieurs à 0.025 microns), qui augmentent avec un meulage plus prolongé. Les tailles des particules d'un monocristal d'hydroxyle-apatite synthétique, préparé à l'aide d'une meulette diamantée, tournant à faible vitesse, variant de 〈0.025 microns à 〉5 microns: les particules plus larges prédominent. Le fait de chauffer les cristaux d'os augmente nettement leur taille: par contre ils ne se modifient pas après meulage à l'aide de billes. Un plan de clivage préférentiel n'a pu être mis en évidence dans l'émail. La nature hétérogène et la morphologie cristalline peuvent, par conséquent, être responsables de la fragmentation élevée, qui a pu être constatée. Cette fragmentation cristalline est probablement responsable de l'élargissement des raies de diffraction aux rayons X, bien que l'espèce cristalline considérée puisse également être en cause.
    Abstract: Zusammenfassung Es wurde am Elektronenmikroskop untersucht, ob die Verbreiterung der Röntgendiffraktionsbanden, welche nach verschiedenen Aufbereitungstechniken beobachtet werden konnte, auf eine Kristallzertrümmerung oder auf Druck zurückzuführen ist. Alle Schmelzproben, die durch Zerreiben mit hoch- oder niedrigtourigen Diamantsteinen oder mit Carbidbohrern gewonnen wurden, enthielten große Mengen von feinabgespaltenem Schmelz, eine relativ große Anzahl von verstreuten einzelnen Kristallen und relativ wenig Partikel (gewöhnlich 〈5 μ), die aus einer variablen Anzahl von intakten Kristallen bestanden. Mit dem Kugelbohrer gewonnene Kontrollproben enthielten Aggregate von intakten Kriställchen in der Größe von 5–10 μ. Längeres Zerreiben mit dem Kugelbohrer ergab signifikante Mengen von feinabgespaltenem Material (〈250 Å), das sich mit zunehmendem Zerreiben noch vermehrte. Wurde ein einzelner großer synthetischer Hydroxyapatitkristall mit einem niedrigtourigen Diamantstein zerrieben, so variierte die Größe der Partikel zwischen 〈250 Å und 〉5 μ, wobei die größeren Partikel vorherrschten. Knochenkriställchen erfuhren beim Ausglühen eine merkliche Vergrößerung, blieben jedoch unbeschädigt nach verlängertem Zerreiben in der Kugelmühle. Es konnte nicht bewiesen werden, daß im Schmelz die Abspaltung nach bevorzugten Flächen vorgeht; die komplexe Natur und die Kristallmorphologie können deshalb für die beobachtete starke Zertrümmerung verantwortlich gemacht werden. Die Bandenverbreiterung, die bei der Röntgendiffraktion beobachtet werden konnte, ist wahrscheinlich auf die Zertrümmerung der Kristalle zurückzuführen, obschon auch Druck als Faktor eine Rolle spielen kann.
    Notes: Abstract A study in the electron microscope was carried out to determine if the broadening of X-ray diffraction patterns was related to crystal fragmentation or strain resulting from the preparative technique. All enamel samples, collected either by grinding with high- or low-speed diamond stones or by carbide burs, contained large amounts of finely-divided enamel, a relatively large number of scattered individual crystals and relatively few particles (usually 〈5 μ in size), containing varying numbers of intact crystals. Ball-ground control samples contained aggregates of unbroken crystallites 5–10 μ in size. Prolonged ball grinding produced a significant amount of finely-divided material (〈0.025 μ), the amount increasing with increased grinding. Particle sizes of material ground from a large single crystal of synthetic hydroxyapatite with a low-speed diamond stone ranged from 〈0.025 μ to 〉5 μ, the larger particles predominating. Annealing bone crystallites increased their size appreciably but they remained undamaged despite prolonged grinding in the ball mill. There was no evidence to suggest a plane of preferred cleavage in enamel; the composite nature and crystal morphology may be responsible, therefore, for the severe fragmentation observed. Crystallite fragmentation is probably responsible for the line-broadening observed in the X-ray diffraction pattern, although strain may also be a contributing factor.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 2
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 13-20 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Phospholipids ; Hydroxyapatite ; Bone ; Chelation
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé L'association de phospholipides et de la phase minérale de tissus calcifiés est étudiée en équilibrant un mélange de phosphatides avec de l'os anorganique. L'os est élué progressivement avec du chloroforme, chloroforme/méthanol et chloroforme/méthanol/HCl. Dans chaque éluat, les phospholipides sont identifiés par chromatographie quantitative. Les phosphatides acides et neutres sont présents, dans des proportions variables, dans l'éluat chloroformique de l'os anorganique. Ces lipides constituent plus de 80% des phospholipides totaux liés. L'extraction chloroforme/méthanol permit d'isoler un groupe de lipides essentiellement neutres. La composition de cet éluat d'os anorganique est voisin de l'extrait de solvant neutre d'os compact bovin minéralisé. Au troisième stade d'élution, on a pensé que lorsque l'acide du produit d'extraction agit comme un agent de déminéralisation, on pouvait comparer l'éluat avec l'extrait lipidique, obtenu après déminéralisation de l'os compact. Certes il existe des similitudes entre les phospholipides acides de l'extrait obtenu après déminéralisation et le troisième éluat lipidique de l'os. Il est possible que les phospholipides acides soient liés par des liaisons coordonnées aux ions Ca2+ et Mg2+ de la maille apatitique de l'os. En présence d'acide ou d'agent de déminéralisation, ces ions métalliques sont déplacés. Le rôle de ces composés de liaison, en tant que ponts entre les phases organiques et inorganiques des tissus calcifiés, est discuté.
    Abstract: Zusammenfassung Durch Äquilibration eines Gemisches von Phosphatiden mit anorganischen Knochen wurde die Bindung zwischen Phospholipiden und dem Mineralanteil von Hartgewebe untersucht. Der Knochen wurde sukzessive mit Chloroform, Chloroform/Methanol und Chloroform/Methanol/HCl eluiert. Die Phospholipide wurden in jedem der Eluate chromatographisch identifiziert und anschließend quantitativ bestimmt. Sowohl die sauren als auch die neutralen Phosphatide waren in verschiedenen Mengen im Chloroformeluat des anorganischen Knochens vorhanden. Zusammen machten diese Lipide über 80% der gesamtengebundenen Phospholipide aus. Die Extraktion in Chloroform/Methanol entzog dem anorganischen Knochen eine Gruppe von Lipiden mit vorwiegend neutralem Charakter. Die Zusammensetzung dieses zweiten Eluates aus dem anorganischen Knochen war jener ähnlich, wie sie für den Extrakt aus dem mineralisierten kompakten Rinderknochen mit einem neutralen Lösungsmittel beschrieben ist. Bei der dritten Elution wurde erörtert, daß dieses Eluat mit dem nach Demineralisation erhaltenen Lipidextrakt von kompakten Knochen verglichen werden kann, da die Säure des Extraktionsmittels demineralisierend wirkt. In der Tat wurden, was die sauren Phospholipide anbetrifft, Ähnlichkeiten zwischen dem Extrakt nach Demineralisation und dem dritten Lipideluat des Knochens festgestellt. Als Interpretation dieser Resultate wurde vorgeschlagen, daß die sauren Phospholipide koordinativ an Ca2+- und Mg2+-Ionen des Apatitgitters des Knochens gebunden sind. In einem sauren oder einem demineralisierenden Milieu werden die Bindungen zu Metallionen zerstört. Die Rolle solcher koordinativ wirkender Verbindungen als Brücken zwischen organischen und anorganischen Phasen mineralisierter Gewebe wurde besprochen.
    Notes: Abstract The association of phospholipids with the mineral phase of hard tissues was investigated by equilibrating a mixture of phosphatides with anorganic bone. The bone was eluted sequentially with chloroform, chloroform/methanol and chloroform/methanol/HCl. In each of the eluates, the phospholipids were identified chromatographically and were quantitated. Both acidic and neutral phosphatides were present, in variable proportions, in the chloroform eluate of the anorganic bone. Together, these lipids accounted for over 80% of the total bound phospholipids. Chloroform/methanol extraction removed a group of lipids from the anorganic bone which was predominately neutral in character. The composition of this second eluate of anorganic bone resembled the reported neutral solvent extract of mineralized bovine compact bone. At the third elution step, it was argued that as the acid in the extractant acted as a demineralizing agent, this eluate could be compared with the post-demineralized lipid extract of compact bone. With respect to their acidic phospholipids, similarities were noted between the post-demineralized extract and the third lipid eluate of bone. To interpret this finding, it is speculated that acidic phospholipids were bound through co-ordinating bonds to Ca2+ and Mg2+ ions of the apatite lattice of bone. In the presence of either acid or a demineralizing agent, these metal ions were displaced from the ligands. The role of such co-ordinating compounds as bridges between organic and inorganic phases of mineralized tissues is discussed.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 3
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 21-29 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Phospholipids ; Bone ; Calcification
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé Les phospholipides neutres, tels que la sphingomyéline, la lécithine et la phosphatidyléthanolamine, sont les phosphatides principaux de l'os compact bovin. Ces lipides constituent plus de 90% des phospholipides de l'os, avant déminéralisation, et plus de 60% des phosphatides totaux extraits de ce tissu. Après déminéralisation, les solvants lipidiques neutres extraient des phospholipides neutres et acides de la matrice osseuse. Le traitement final de la matrice osseuse avec un mélange de solvants acides permet de récupérer une faible quantité de phosphatides acides et neutres. Pour expliquer la nécessité d'une déminéralisation au cours de l'extraction lipidique, il est possible que les lipides de l'extrait, obtenu après déminéralisation. soient liés à la phase minérale de l'os. Afin d'exclure la possiblité que cette extraction soit dûe simplement aux cristaux d'apatite, pouvant agir comme obstacle à la diffusion du solvant, l'effet de l'extraction lipidique sur des fractions de particules osseuses de diverses tailles a été étudié. La composition des extraits lipidiques n'est pas liée à la taille des particules: le minéral osseux ne parait done pas constituer un obstacle au passage des solvants lipidiques.
    Abstract: Zusammenfassung Die neutralen Phospholipide Sphingomyelin, Lecithin und Phosphatidyläthanolamin sind die wichtigsten Phosphatide des kompakten Rinderknochens. Zusammengenommen machen diese Lipide über 90% der Phospholipide, welche vor der Demineralisation dem Knochen entzogen worden sind und über 60% der aus diesem Gewebe extrahierten totalen Phosphatide aus. Nach der Demineralisation konnten mit neutralen Lösungsmitteln für Lipide ein weiterer Anteil an neutralen und eine beträchtliche Menge an sauren Phospholipiden aus der Knochenmatrix extrahiert werden. Am Schluß wurde die Knochenmatrix mit einem angesäuerten Lösungsmittelgemisch behandelt, und es konnte eine kleine Menge saurer sowie neutraler Phosphatide aus dem Gewebe extrahiert werden. In Anbetracht der notwendigen Demineralisierung bei der Lipidextraktion wurde vorgeschlagen, daß die Lipide aus dem nach Demineralisation gewonnenen Extrakt an die Mineralphase des Knochens gebunden sind. Um die Möglichkeit auszuschließen, daß dieser Extrakt lediglich durch die Apatit-Kristalle bedingt ist, die die Diffusion des Lösungsmittels verhindern, wurde die Wirkung der Lipidextraktion auf Knochenpulver verschiedener Partikelgrößen geprüft. Jedoch besteht keine Beziehung zwischen der Zusammensetzung des Lipidextraktes und der Größe der Partikel. Daraus folgt, daß das Knochenmineral den Durchgang der Lipidextraktionsmittel in das Gewebe nicht verhindert.
    Notes: Abstract The neutral phospholipids sphingomyelin, lecithin and phosphatidylethanolamine were the principal phosphatides of compact bovine bone. Together, these lipids accounted for over 90% of the phospholipids removed from bone, prior to demineralization, and for over 60% of the total phosphatides extracted from this tissue. Following demineralization, neutral lipid solvents removed a further quantity of neutral, and a considerable number of acidic, phospholipids from the bone matrix. A final treatment of the bone matrix with an acidified solvent mixture removed a small number of acidic, as well as neutral, phosphatides from the tissue. To account for the necessity of the demineralization step in the lipid extraction procedure, it was suggested that lipids of the post-demineralized extract were bound to the mineral phase of bone. To exclude the possibility that this extract was merely due to the apatite crystallites acting as a solvent diffusion barrier, the effect of the lipid extraction of bone of different particle size was examined. However, it was found that the composition of the lipid extracts was not related to the particle area; hence, it was inferred that the bone mineral was not obstructing the passage of the lipid extractants in the tissue.
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  • 4
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 30-38 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Phospholipids ; Bone ; Cartilage ; Mucopolysaccharides
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé Les tissus squelettiques de poissons téléostéens (Scomber scombrus, etGadus callaria) et d'élasmobranches (Raja batis etScyllium canicula) sont analysés pour leur contenu en lipides. Plus de phospholipides sont extraits des tissus osseux de téléostéens que des tissus cartilagineux d'élasmobranches. Outre la proportion lipidique plus élevée de l'os de téléostéens, des différences de composition lipidique ont été notées entre les deux tissus. Avant démineralisation, les extraits deGadus et Scomber sont surtout constitués de phospholipides neutres. Par contre, les phosphatides des tissus cartilagineux contiennent des quantités importantes de phospholipides acides. Après déminéralisation de l'os et du cartilage de poissions, les solvants pour lipides neutres éluent á la fois les phosphatides acides et neutres de ces tissus. Après extraction des lipides, le traitement des tissus déminéralisés par des solvant acides extrait à nouveau des lipides. Dans cette fraction finale, un grand nombre de phospholipides ont été retrouvés. A ce stade, d'autres phosphatides, que ceux mis en évidence chez les poissons précités, sont extraits à partir de l'os déminéralisé deScomber. Le principal phosphatide de la fraction finale est constitué par la cardiolipine dont des quantités plus importantes, que celles notées au niveau des autres tissus durs, sont retrouvées dans l'os deScomber.
    Abstract: Zusammenfassung Die Skeletgewebe der Knochenfische (Scomber scombrus undGadus callaria) und der Knorpelfische (Raja batis undScyllium canicula) wurden auf ihren Lipidgehalt untersucht. Es ergab sich, daß mehr Phospholipide aus dem Knochengewebe der Knochenfische extrahiert werden konnte, als dies aus dem Knorpelgewebe der Knorpelfische möglich war. Es wurde nicht nur eine größere Lipidmenge im Knochen der Knochenfische festgestellt, sondern auch noch Unterschiede in der Lipidzusammensetzung der beiden Gewebe beobachtet. Die vor der Demineralisation hergestellten Extrakte von Gadus und Scomber bestanden vorwiegend aus neutralen Phospholipiden. Dagegen enthielten die Phosphatide der Knorpelgewebe ansehnliche Mengen saurer Phospholipide. Nach der Demineralisation von Fischknochen und-knorpel wurden durch neutrale Lipidlösungsmittel sowohl saure als auch neutrale Phosphatide aus diesen Geweben eluiert. Wenn die demineralisierten Gewebe, denen bereits Lipide entzogen wurden, noch mit angesäuerten Lösungsmitteln behandelt wurden, konnten erneut Lipide aus Knochen und Knorpel extrahiert werden. Im letzten Extrakt konnten die verschiedensten Phospholipide nachgewiesen werden. In diesem Stadium konnten verhältnismäßig mehr Phosphatide aus dem demineralisierten Knochen von Scomber entzogen werden, als dies bei anderen Fischarten möglich war. Das wichtigste Phosphatid dieses letzten Extraktes war Cardiolipin. Tatsächlich war mehr Cardiolipin in den Knochen von Scomber vorhanden als in allen andern Hartgeweben.
    Notes: Abstract The skeletal tissues of teleost (Scomber scombrus andGadus callaria) and elasmobranch (Raja batis andScyllium canicula) fish were examined for the presence of lipids. It was found that more phospholipid was removed from the bony tissues of the teleosts than was extractable from the cartilaginous tissues of the elasmobranchs. Apart from there being a greater proportion of lipid associated with teleost bone, differences were also noted in the lipid composition of the two tissues. Before demineralization, inGadus andScomber, the extracts were predominantly of neutral phospholipids. In contrast, the phosphatides of the cartilaginous tissues contained appreciable quantities of acidic phospholipids. After demineralization of piscine bone and cartilage, neutral lipid solvents eluted both acidic and neutral phosphatides from these tissues. When the demineralized lipid extracted tissues were treated with acidified solvents, lipid was again removed from the bone and cartilage. In this final extract, a wide variety of phospholipids was detected. At this stage, more phosphatide was extracted from the demineralized bone ofScomber, compared with the other piscine species. The principal phosphatide of this final extract was cardiolipin. More cardiolipin was present in the bone ofScomber than in any other hard tissue.
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  • 5
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 189-195 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Bone ; Pyrophosphatase ; Acid phosphatase ; Alkaline Phosphatase
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé L'hydrolyse enzymatique du pyrophosphate et des esters phosphates est étudiée à l'aide d'extraits d'os de jeunes lapins. Les extrémités proximales de l'humérus et les extrémités distales des fémurs sont homogénéisées dans un tampon barbital (7.5 mM) à pH 7.4. L'activité de la pyrophosphatase extraite a des pH optimaux acide et alcalin. L'activité en pyrophosphatase acide, à pH 5.0, est indépendante du magnésium jusqu'à une concentration de 3 mM et est inhibée par un excès de cet ion. Les activités de la pyrophosphatase, à pH 5.0 et 7.4, sont inhibées par le fluorure. La constante de Michaelis de la pyrophosphatase, au pH optimum de 5.0, est de 1.4×10−3M. L'extrait d'os, placé dans une colonne Sephadex G200 et élué avec un tampon barbital (7.5 mM) à pH 7.4, contenant 1% de chlorure de sodium, permet une séparation des deux activités de pyrophosphatase à pH 5.0, l'activité optimale est associée avec une activité de phosphatase acide. L'activité des deux pyrophosphatase alcaline des os de lapins est étudiée de l'age de 5 à 60 jours.
    Abstract: Zusammenfassung Die enzymatische Hydrolyse von Pyrophosphat und Phosphatestern wurde an Knochenextrakten von jungen Kaninchen untersucht. Proximale Humerus- und distale Femurteile wurden in Barbitalpuffer (7.5 mM) bei einem pH von 7,4 homogenisiert. Die somit extrahierte Pyrophosphataseaktivität hatte ein saures und ein alkalisches pH-Optimum. Die saure Pyrophosphataseaktivität bei pH=5,0 blieb durch Magnesiumzusatz bis zu einer Konzentration von 3 mM unbeeinflußt und wurde durch einen Überschuß dieses Ions inhibiert. Beide Pyrophosphataseaktivitäten bei pH 5,0 sowie bei pH 7,4 wurden durch Fluoride inhibiert. Die Michaeliskonstante der Pyrophosphatase mit maximaler Aktivität bei pH=5,0 betrug 1,4·10−3M. Wenn der Knochenextrakt durch eine Sephadex G-200-Säule gegeben und die Kolonne anschließend mit einem Barbitalpuffer (7.5 mM) bei pH 7,4 mit Zusatz von 1% Natriumchlorid eluiert wurde, konnten die beiden Pyrophosphataseaktivitäten getrennt werden; diejenige mit einem Aktivitätsoptimum bei pH 5,0 zeigte ebenfalls die Aktivität einer sauren Phosphatase. Die Resultate der Aktivitätsbestimmung der beiden Pyrophosphatasen und der alkalischen Phosphatase in Kaninchenknochen in der Wachstumsperiode zwischen 5 und 60 Tagen werden mitgeteilt.
    Notes: Abstract A study was conducted of the enzymatic hydrolysis of pyrophosphate and ester phosphates by extracts of bones of young rabbits. The proximal ends of humeri and distal ends of femurs were homogenized in barbital buffer (7.5 mM) at pH 7.4. The extracted pyrophosphatase activity had acid and alkaline pH optima. The acid pyrophosphatase activity at pH 5.0 was independent of magnesium up to a concentration of 3 mM and was inhibited by an excess of this ion. Pyrophosphatase activities at both pH 5.0 and 7.4 were inhibited by fluoride. The Michaelis constant of pyrophosphatase with pH 5.0 optimum activity was 1.4×10−3 M. The bone extract, when loaded on a column of Sephadex G-200 and eluted with barbital buffer (7.5 mM) at pH 7.4 containing 1% sodium chloride, allowed a separation of the two pyrophosphatase activities; that at pH 5.0 optimum activity was associated with acid phosphatase activity. Results of experiments of the two pyrophosphatase activities and alkaline phosphatase in bones of rabbits as they aged from 5 to 60 days are presented.
    Type of Medium: Electronic Resource
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  • 6
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 183-188 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Bone ; Enamel ; Apatite ; Hydroxyl ; Composition
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé Une méthode de détermination du contenu total en hydroxyle est décrite au niveau l' élément minéral des tissus calcifés. De l'os bovin anorganique et de l'émail dentaire sont dissouts dans un solvant non-aqueux (du chlorure méthanolique hydrogéné) et l'eau formée à partir des ions hydroxyle et carbonate, par dissolution acide du minéral, est déterminée par titration selon la méthode de Karl Fischer. L'eau, formée par réaction avec le carbonate, est calculée et soustraite du montant total de l'eau pour dèterminer la quantité d'eau, dérivée de l'ion hydroxyle. Les éléments inorganiques des échantillons sont ègalement déterminés. En utilisant des équations simultanées, basées sur l'équivalence électrochimique des ions à la surface et dans la maille de l'hydroxyle-apatite, les résultats des études de composition chimique sont utilisés pour calculer les quantités d'hydroxyle dans chaque substance. Le contenu en ion hydroxyle de l'os anorganique, basé sur ce traitement théorique, tenant compte de 2 hydroxyles par molécule, est de 1.40 moles par gramme, alors que, par analyse directe, on trouve 1.01±0.026 (S.E) m moles par gramme. Pour un échantillon d'émail dentaire, d'origine diverse, les valeurs théoriques et les valeurs expérimentales, relevées pour les contenus en hydroxyle, sont respectivement de 1.64 et 1.62 m moles par gramme.
    Abstract: Zusammenfassung Es wird eine Methode zur Bestimmung des gesamten Hydroxylgehaltes im Mineral von verkalkten Geweben beschrieben. Anorganischer Knochen und Zahnschmelz vom Rind wurden in einem wasserfreien Lösungsmittel (Methanolhydrogenchlorid) gelöst und das aus Hydroxyl- und Carbonat-Ionen sich bildende Wasser beim sauren Auflösen des Minerals mit der Titration nach Karl Fischer bestimmt. Das aus der Carbonatreaktion entstehende Wasser wurde berechnet, von der gesamten Wassermenge abgezogen und so der vom Hydroxylion her stammende Wasseranteil ermittelt. Die Proben wurden auf anorganische Bestandteile hin untersucht. Unter Anwendung simultaner Gleichungen, die sich auf die elektrochemische Äquivalenz der Ionen an der Oberfläche und im Kristallgitter von Hydroxyapatit stützten, konnten die Werte der chemischen Zusammensetzung zur Berechnung der Hydroxylmenge in jeder der Substanzen benützt werden. Auf Grund der theoretischen Berechnung und unter Annahme von 2 Hydroxylgruppen pro Molekül fand sich im anorganischen Knochen ein Hydroxylionengehalt von 1,40 mMol/g; durch die direkte Bestimmung konnte ein solcher von 1,01±0,026 (S.E.) mMol/g nachgewiesen werden. In einer gepoolten Zahnschmelzprobe betrug der Hydroxylgehalt theoretisch berechnet 1,64 mMol/g und praktisch bestimmt 1,62 mMol/g.
    Notes: Abstract A method is described for estimation of the total hydroxyl content of the mineral of calcified tissues. Anorganic bovine bone and dental enamel were dissolved in a nonaqueous solvent (methanolic hydrogen chloride) and the water formed from hydroxyl and carbonate ions by acid dissolution of the mineral was determined by the Karl Fischer titration. Water formed by reaction of carbonate was calculated and subtracted from the total amount of water to give the quantity of water derived from hydroxyl ion. The samples were analyzed for inorganic constituents. Using simultaneous equations, based upon the electrochemical equivalence of ions on the surface and lattice of hydroxyapatite, the data of chemical composition were used to calculate the amounts of hydroxyl in each substance. The content of hydroxyl ion of anorganic bone based on this theoretical treatment, assuming 2 hydroxyls per molecule, was 1.40 m moles per gram, and by direct analysis was 1.01±0.026 (S.E.) m moles per gram. With a pooled dental enamel sample, theoretical and determined values for hydroxyl contents were 1.64 and 1.62 m moles per gram, respectively.
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  • 7
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    Springer
    Calcified tissue international 5 (1970), S. 222-235 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Mechanochemistry ; Bone ; Remodeling ; Stress
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé Un mécanisme nouveau tente d'expliquer comment des forces mécaniques augmentées ou diminuées, appliquées à l'os, sont transformées en activité ostéoblastique et/ou ostéoclastique. Une hypothèse mécano-chimique du remaniement osseux, induit par stress mécanique, est émise pour expliquer ce phénomène. L'os répond á un stress mécanique par une croissance différentielle de façon á résister au stress appliqué: par suite le remaniement osseux induit mécaniquement est probablement sous le controle d'un système “feedback” négatif. L'hypothèse consiste dans le fait qu'un changement de charge au niveau de l'os modifie la tension au niveau des cristaux d'apatite de l'os. Ceci modifie la solubilité des cristaux qui fournit ainsi le message de “feedback” négatif nécessaire aux cellules osseuses, sous la forme d'un changement chimique, indiut par un phénomène mécanique. Les cellules aggissent alors pour compenser les modifications de l'activé calcique localisée soit en construisant de l'os pour redistribuer le stress augmenté, ou en résorbant de l'os, qui est en surplus des besoins structuraux, liés à un stress réduit. Pour tester cette hypothèse, des cristaux d'hydroxyleapatite sont soumis à un stress et des changements d'activité ionique du calcium sont enregistrés à l'aide d'une électrode à cation divalent. Les résultats démontrent qu'un effet mécano-chimique peut etre détecté dans les cristaux d'apatite qui, soumis à un stress, engendrent une activité en calcium de 9×10−5 moles/litres et de 7×10−5 moles/litre, dans des conditions sans stress. Les résultats expérimentaux de cette étude et les données de la physiologie cellulaire s'accordent avec l'hypothèse mécano-chimique proposée.
    Abstract: Zusammenfassung Um zu erklären, in welcher Weise auf Knochen applizierte, erhöhte oder verminderte mechanische Stresse zu einer Osteoblasten- und/oder Osteoklastenaktivität führen, wird ein neuer Mechanismus vorgeschlagen. Eine mechanochemische Hypothese der Knochenneubildung, verursacht durch mechanische Stresse, wird besprochen, um dieses Phänomen zu erklären. Knochen reagiert auf mechanische Stresse mit differenziertem Wachstum, um damit dem angewandten Stress zu widerstehen; daraus folgt, daß mechanisch induzierte Knochenneubildung vermutlich durch ein negatives Feedback-System reguliert wird. Die Hypothese besteht darin, daß eine Veränderung der Ladung des Knochens eine Veränderung der Spannung der Hydroxyapatitkristalle im Knochen zur Folge hat. Dies wiederum verändert die Löslichkeit der Kristalle und gibt damit die benötigte negative Feedback-Botschaft an die Knochenzellen in Form einer mechanischinduzierten chemischen Umgestaltung weiter. Die Zellen verhalten sich nun dementsprechend, um der Änderung der örtlichen Calciumaktivität entgegenzuwirken; entweder wird Knochengewebe gebildet, um einen erhöhten Stress neu zu verteilen, oder jener Knochenanteil wird beseitigt, der bei reduziertem Stress einen Überschuß der Strukturbedürfnisse darstellt. Um diese Annahme zu überprüfen, wurden synthetische Hydroxyapatitkristalle einem Stress unterworfen, und die Änderung in der Aktivität der Calciumionen wurde mittels einer divalenten Elektrode zur Messung der Kationenaktivität registriert. Die Resultate zeigen, daß ein mechanochemischer Effekt in den Hydroxyapatitkristallen nachgewiesen werden kann, die unter Stress eine Calciumaktivität von 9·10−5 Mol/Liter, dagegen ohne Stress eine solche von 7·10−5 Mol/Liter erzeugen. Die Ergebnisse dieser Untersuchungen einerseits und die Aussagen der Zellenphysiologie andererseits stimmen mit der hier vorgeschlagenen mechanochemischen Hypothese überein.
    Notes: Abstract A new mechanism is presented to explain how increased or decreased mechanical stresses applied to bone are translated into osteoblastic and/or osteoclastic activity. A mechano-chemical hypothesis for bone remodeling induced by mechanical stress is presented in an attempt to explain this phenomenon. Bone responds to mechanical stress by differential growth so as to resist the applied stress; therefore mechanically induced bone remodeling is probably regulated by a negative feedback system. The hypothesis is that a change in the loading of bone results in an altered straining of the hydroxyapatite crystals in bone. This in turn alters the solubility of the crystals, providing the required negative feedback message to the bone cells in the form of a mechanically induced chemical change. The cells then take appropriate action to compensate for the alteration in the localized calcium activity either by building up bone to redistribute an increased stress, or by removing bone which is surplus to the structural needs imposed by a reduced stress. In order to test the hypothesis, synthetic hydroxyapatite crystals were stressed and changes in calcium ion activity were recorded from a divalent cation activity electrode. The results show that a mechanochemical effect can be detected in hydroxyapatite crystals which, when stressed, generate a calcium activity of 9×10−5 moles/l compared to 7×10−5 moles/l when unstressed. The experimental results in this study and evidence from cellular physiology are consistent with the mechanochemical hypothesis proposed here.
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  • 8
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Bone ; Osteodystrophy ; Hyperparathyroidism ; Resorption ; Osteoclasts
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé La profondeur moyenne de l'os érodé, par unité de temps, au niveau de centres de résorption, est musurée sur des biopsies osseuses, marquées à la tétracycline et prélevées au niveau de 16 patients en dialyse rénale périodique, d'un adolescent présentant un rachitisme rénal et de l'hyperparathyroidie secondaire, et de 2 femmes adultes atteintes d'hyperparathyroidie primitive. L'index de résorption cellulaire est sub-normal au niveau des surfaces d'os haversien de tous les groupes. Il est sub-normal au niveau des surfaces osseuses de l'endoste cortical dans le groupe sous dialyse. Le matériel biopsique était insuffisant pour établir l'index dans les deux autres groupes. Il apparait ainsi que les ostéoclastes individuels, provenant de cas d'hyperparathyroidie de longue durée, résorbent l'os plus lentement que dans des conditions normales.
    Abstract: Zusammenfassung Die mittlere Tiefe von Knochenerosionen, die pro Zeiteinheit in den Resorptionszentren entstanden, wurde in Tetracyclin-markierten Knochenbiopsien gemessen. Die Biopsien stammten von 16 erwachsenen, periodisch hämodialysierten Patienten, ferner von einem Jugendlichen mit renaler Rachitis und sekundärem Hyperparathyreoidismus sowie von zwei erwachsenen Frauen mit erwiesenem Hyperparathyreoidismus. Dieser Index der Resorption auf cellulärer Ebene war in allen Gruppen subnormal, wenn er auf der Innenschicht der Haverschen Kanäle bestimmt wurde. Er war ebenfalls subnormal in der Gruppe dialysierter Patienten auf die cortico-endostale Knochenoberfläche bezogen. Bei den anderen zwei Gruppen konnte der Index für die letztgenannte Oberfläche nicht bestimmt werden, da zu wenig Material vorlag. Diese Resultate lassen vermuten, daß einzelne Osteoklasten in Fällen von langdauerndem Hyperparathyreoidismus beim Menschen den Knochen langsamer resorbieren als dies normalerweise der Fall ist.
    Notes: Abstract The mean depth of bone eroded in unit time at resorption centers was measured in tetracycline-labeled bone biopsies of 16 adult patients on periodic renal dialysis, of one adolescent boy with renal rickets and secondary hyperparathyroidism, and of two adult women with proven primary hyperparathyroidism. This index of cellular-level resorption was subnormal on haversian bone surfaces in all groups, and it was subnormal on cortical-endosteal bone surfaces in the dialysis group; there was insufficient material to evaluate the index on this latter surface in the other two groups. The results suggest that individual osteoclasts resorb bone more slowly than normal in naturally occurring human hyperparathyroid states of long standing.
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    Springer
    Calcified tissue international 13 (1973), S. 217-225 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Fluoride ; Parathyroid ; Calcitonin ; Bone ; Calcium
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé L'effet du fluor, de la parathormone et de la calcitonine sur le métabolisme du calcium osseux a été étudié en culture de tissu en utilisant des demi-calottes crâniennes de souris âgées de cinq jours. Les concentrations de fluor dans les cendres des calottes crâniennes de 0,007% (groupe peu fluoré), 0,041% (groupe moyennement fluoré) et 0,107% (groupe hautement fluoré) ont été obtenues en variant l'ingestion maternelle et post-natale en fluor. Le fluor inhibe la perte de calcium des os cultivés dans le milieu témoin et celui contenant la parathormone et favorise l'enrichissement en laccium des os cultivés dans un milieu contenant de la calcitonine. De l'os mort des groupes fortement et moyennement fluorés s'enrichit plus en calcium à partir du milieu de culture que les os du groupe pauvre en fluor. Le fluor semble agir sur le métabolisme du calcium osseux essentiellement par diminution de la solubilité minérale.
    Abstract: Zusammenfassung Der Einfluß von Fluorid, Parathormon und Calcitonin auf den Calciumstoffwechsel im Knochen wurde in einem Knochenkultur-System untersucht, wobei Halbcalvarien von 5 Tage alten Mäusen verwendet wurden. Fluoridgehalte in der Asche der Halbcalvarien von 0,007% (Gruppe mit niedrigem Fluoridgehalt), 0,041% (Gruppe mit mittlerem Fluoridgehalt) und 0,1075 (Gruppe mit hohem Fluoridgehalt) wurden erhalten, indem die Fluorideinnahme der Mütter oder der Neugeborenen verändert wurde. Fluorid hemmte den Calciumverlust aus Knochen, welche im Kontrollmedium oder in Parathormon-enthaltenden Medien kultiviert worden waren, und es förderte die Calciumaufnahme von Knochen, welche in Calcitoninenthaltendem Medium kultiviert worden waren. Die toten Knochen der Gruppen mit mittlerem und hohem Fluoridgehalt nehmen mehr Calcium aus dem Kulturmedium auf als die Knochen der Gruppe mit niederem Fluorid. Fluorid scheint vor allem durch eine Herabsetzung der Mineral-Löslichkeit auf den Calciumstoffwechsel der Knochen zu wirken.
    Notes: Abstract The influence of fluoride, parathyroid hormone and calcitonin on bone calcium metabolism was investigated in a bone culture system using half-calvaria of five-day old mice. Fluoride levels in the ash of half-calvaria of 0.007% (low fluoride group), 0.041% (moderate fluoride group), and 0.107% (high fluoride group) were achieved by varying the maternal and neonatal intake of fluoride. Fluoride inhibited the loss of calcium from bones cultured in control medium and parathyroid hormone-containing media, and promoted the uptake of calcium by bones cultured in medium containing calcitonin. Dead bones of the moderate and high fluoride groups took up more calcium from the culture medium than bones of the low fluoride group. Fluoride appears to exert its effect on bone calcium metabolism predominantly via a reduction in mineral solubility.
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  • 10
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    Springer
    Calcified tissue international 13 (1973), S. 73-82 
    ISSN: 1432-0827
    Keywords: Bone ; Apatite ; Hydroxide ; Carbonate ; Infrared
    Source: Springer Online Journal Archives 1860-2000
    Topics: Biology , Medicine , Physics
    Description / Table of Contents: Résumé L'étude de spectres infra-rouges montre que le minéral osseux de jeune rat et les apatites synthétiques, formés à des pH, force ionique et température physiologiques sont très déficients en ion OH; ces apatites biologiques et synthétiques présentent d'importants défauts internes de maille. En outre, une proportion significative des ions CO3 2- de mineral osseux de rat est structurée de façon lâche dans un environnement amorphe ou superficiel. Les ions carbonate dans l'os chauffé sous vide ou dans les apatites synthétiques formés à pH physiologique paraissent être situés dans des environnements locaux multiples. Le CO3 2- contenu dans ces structures peut se substituer dans des positions PO4 3- et (à un degré moindre) OH−, bien que des variations importantes de ou dans ces positions sont dues à des défauts de maille. Les carbonato-apatites, formés par transformation thermique (600o) de phosphates calciques amorphes et contenant 4–9% de CO3 2-, présentent surtout du CO3 2- dans des environnements OH−. Une recristallisation thermique des apatites biologiques et synthétiques, dans une atmosphère d'air, augmente le contenu en OH− et redispose les positions CO3 2-. Cependant, de telles formations bien cristallisées sont différentes des précurseurs apatitiques.
    Abstract: Zusammenfassung Die Infrarotspektroskopie ergab, daß sowohl natives Rattenknochenmineral als auch synthetische Apatite, welche bei physiologischem pH, Ionenstärke und Temperatur gebildet wurden, an Hydroxydionen stark defizient sind. Es ist ebenfalls ersichtlich, daß diese biologischen und synthetischen Apatitkristalle beträchtliche innere Verzerrungen aufweisen (Gitterdefekte). Weiterhin zeigt ein bedeutender Anteil der CO3 2--Ionen im Rattenknochenmineral eine lockere Struktur in amorpher Umgebung oder an der Oberfläche. In Vakuumerhitzem Knochen oder in synthetischen Apatit (mit physiologischem pH), welches in der Lösung gebildet wurde, scheinen sich die Carbonationen in verschiedenen Umgebungen zu finden. CO3 2- im Inneren dieser Stoffe kann in PO4 3--und (in viel kleineren Mengen) OH−-Positionen ausgetauscht werden, obwohl eine beträchtliche Abweichung von und innerhalb dieser Stellen wahrscheinlich auf Gitterdefekte zurückzuführen ist. Carbonat-Apatite, welche durch die thermische Umwandlung (600°C) von 4–9% CO3 2- enthaltendem amorphem Calciumphosphat gebildet wurden, zeigen in erster Linie in OH−-Umgebung CO3 2-. Die thermische Umkristallisierung von biologischen und synthetischen Apatiten in einer Luftatmosphäre erhöht den OH−-Gehalt und verteilt die CO3 2--Lokalisationen neu. Solche sehr schön kristallisierten Produkte spiegeln jedoch durchaus nicht ihre nativen Apatitvorbilder wider.
    Notes: Abstract Infrared spectral data indicate that both native rat bone mineral and synthetic apatites formed at physiological pH, ionic strength and temperature are extensively deficient in hydroxide ion content; the data also indicate that these biological and synthetic apatites contain considerable internal distortions (lattice defects). In addition, a significant portion of the CO3 2- ions in rat bone mineral is loosely-structured in either an amorphous or surface environment. Carbonate ions in vacuum-heated bone or solution-ripened synthetic (physiological pH) apatites appear to be in multiple local environments. Internal CO3 2- in these materials may be substituted in PO4 3- and (in much lesser amounts) OH− positions, although considerable deviation from or within these sites is probable due to lattice defects. Carbonateapatites produced by thermal conversion (600o) of amorphous calcium phosphates containing 4–9% CO3 2- exhibit CO3 2- mainly in OH− environments. Thermal recrystallization of biological and synthetic apatites in an air atmosphere increases OH− content and reorganizes CO3 2- locales. However, such extremely well-crystallized products are not at all representative of their native apatitic precursors.
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