Elsevier

Biochimie

Volume 57, Issues 6–7, 8 October 1975, Pages 811-824
Biochimie

Further analysis of acyl-CoA-ACP-transacylases of Mycobacterium smegmatis: Identification of a long chain alkyl malonyl-CoA-ACP-transacylase

https://doi.org/10.1016/S0300-9084(75)80056-3Get rights and content

Summary

Homogenates were prepared from three sources, Mycobacterium smegmatis Saccharomyces cerevisiae and Escherichia coli and tested for docosyl malonyl-CoA-ACP transacylase activity, using ACP purified from E. coli strain B and [2R, 2S, 1, 3-14C2] docosyl malonyl-CoA synthesized chemically, as substrates. Only homogenates of M. smegmatis showed positive transacylase activity.

Successive chromatographies on Sephadex G-150 and then on DEAE-Sephadex A-50 prove that neither the palmityl-CoA-ACP-transacylase nor the malonyl-CoA-ACP-transacylase of M. smegmatis are responsible for this activity.

The question concerning the identity of the enzyme with one of the two entities exhibiting acetyl-CoA-ACP-transacylase activity, previously identified in homogenates of this microorganism (1973 this journal, 55, 1381–1394), remains open for further experimentation.

The physiological significance of the presence of a long chain alkyl malonyl-CoA-ACP-transacylase in homogenates of M. smegmatis, a representative of the Actinomycetales, is discussed in relation to the mechanism of the biosynthesis of mycolic acids.

Chromatography on Sephadex G-100 showed that the substrate of the enzyme, docosyl malonyl-CoA, exists, in 50molar aqueous solution, mostly in an aggregated state. A factor has been identified in the homogenates, which in the presence of radioactive docosyl malonyl-CoA, leads to the formation of a radioactive material showing an apparent molecular weight less than 10000. The nature of this material is discussed.

Résumé

Des homogénats ont été préparés à partir de trois sources, Mycobacterium smegmatis, Saccharomyces cerevisiae et Escherichia coli et testés pour l'activité docosyl malonyl-CoA-ACP-transacylasique, en utilisant l'ACP purifiée à partir d'E. coli souche B, et le [2R, 2S, 1, 3-14C2] docosyl malonyl-CoA, synthétisé chimiquement, comme substrats. Uniquement les homogénats de M. smegmatis ont montré l'activité transacylasique positive.

Des chromatographies successives sur Sephadex G-150 et puis sur DEAE-Sephadex A-50 ont permis de montrer que ni les palmityl-CoA-ACP-transacylases ni la malonyl-CoA-ACP-transacylase de M. smegmatis ne sont responsables de cette activité.

La question concernant l'identité de l'enzyme avec l'une des deux entités présentant l'activité acetyl-CoA-ACP-transacylasique, identifiées précédemment dans les homogénats de ce microorganisme ((1973) ce journal, 55, 1381–1394), reste ouverte à d'autres expérimentations.

La signification physiologique de la démonstration de la présence d'une alkyl malonyl-CoA-ACP-transacylase à longue chaîne dans les homogénats de M. smegmatis, un des représentants d'Actinomycétales est discutée en relation avec le mécanisme de la biosynthèse des acides mycoliques.

La chromatographie sur Sephadex G-100 a montré que le substrat de l'enzyme, docosyl malonyl-CoA. existe, en solution aqueuse 50molaire, essentiellement dans un état agrégé. Un facteur a été identifié dans les homogénats, qui, en présence du docosyl malonyl-CoA marqué, conduit à la formation d'un matériel radioactif présentant un poids moléculaire apparent de moins de 10000. La nature de ce matériel est discutée.

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