Über die verschiedenen Arten von Farbänderungen bei Azofarbstoffen

Zusammenfassung

Einige vor kurzem entdeckte Farbänderungseffekte von Azofarbstoffen in histologischen Gewebsschnitten wurden auf ihre Ursachen untersucht und für den praktischen Gebrauch in verschiedene Gruppen eingeteilt.

Es wurde dargelegt, daß die bei zunehmender Schichtdicke der Farbstofflösung oder bei zunehmender Konzentration des gelösten Farbstoffs zu beobachtende Farbänderung auf rein optischen Gründen beruht und mit der chemischen Natur des Farbstoffs oder des gefärbten Substrats nichts zu tun hat. Es wird angegeben, wie dieser Effekt im histologischen Präparat zu erkennen ist.

Eine zweite Art von Farbänderung von Azofarbstoffen konnte auf den Einfluß desph-Werts zurückgeführt werden. Dabei tritt eine Änderung des Absorptions-spektrums des verwendeten Farbstoffs an der gefärbten Struktur ein. Im Gewebsschnitt können solche Farbänderungen auf lokaleph-Unterschiede hinweisen, die dann durch weitere Untersuchungen gesichert werden müssen.

Als eine dritte Art der Farbänderung wurde diejenige des Fettfarbstoffs Sudanschwarz B untersucht. Dieser Farbstoff erscheint je nach Lösungsmittel in einer fast schwarzen oder in einer roten Lösungsform. Man kann damit also schwarzlösende und rotlösende Lipide unterscheiden. Im sudanschwarzgefärbten Gewebeschnitt gelingt es unter günstigen Umständen, im polarisierten Licht oder im einfachen Dunkelfeld rotlösende Phosphatide auch neben den schwarzlösenden Neutralfetten und Cholesterinen sichtbar zu machen.

Eine vierte Gruppe von Farbänderungen beobachtet man im polarisierten Licht. Drei grundsätzlich verschiedene Ursachen können dabei verantwortlich sein: I. Polarisationsfarben, 2. Dichroismus, 3. selektive Verstärkung der Doppelbrechung (Dispersion der Doppelbrechung). Im Einzelfall können auch diese Farbänderungseffekte (aus einer Ursache oder aus der Kombination mehrerer Ursachen) eine relative Spezifität für eine bestimmte Struktur im histologischen Präparat erreichen. Dies wurde am Beispiel des kongorotgefärbten Amyloids und am Beispiel der Evans' Blau-gefärbten Mukopolysaccharide erläutert.

Summary

A few recently discovered colour-change effects of azo dyes in histological preparations were examined for their causes, and divided into different groups for practical use. It was shown that the colour -change, to be seen when the layer-thickness of the dye solution, or when the concentration of the dissolved dye increased, is due to purely optical causes, and has nothing to do with the chemical nature of the dye, or of the dyed substrate. It is explained, how this effect is to be recognised in the histological preparation.

A second kind of colour-change of azo dyes could be attributed to the influence of theph value. Here, there takes place a change in the absorption spectrum of the dye used, on the structure dyed. In the preparations, such changes in colour can point to localph differences, which must then be verified by further investigations.

The fat-dye „Sudan black B“ was investigated as a third kind of colour-change. According to the solvent used, this dye appears in an almost black, or in a red solution-form. With its aid, therefore, one can distinguish lipids, which dissolve red and black. With tissue-cuts coloured with „Sudan black“, one can succeed (in favourable conditions in polarized light or in a simple darkfield) in showing up phosphatides, which dissolve red, in addition to the neutral fats (dissolving black) and cholesterol.

A fourth group of colour-changes can be observed in polarized light. Three basically different causes may be responsible. 1. Polarizationcolours, 2. dichroism, 3. selective strengthening of the double refractility (dispersion of the double refractility.) Singly, these colour-change effects, from one cause or from a combination of several, may reach a very high specificity for a certain structure in the histological preparation. This was illustrated with the example of the amyloids dyed congo red, and of the mucopolysaccharides, dyed Evans' blue.