Determination of ascorbic acid, dehydroascorbic acid, and isoascorbic acid in blood

Zusammenfassung

High-performance-liquid-Chromatographie mit UV-Nachweis bei 254 nm wurde zur Bestimmung von Ascorbinsäure, Dehydroascorbinsäure und Isoascorbinsäure in Plasma und Erythrocyten von gesunden Probanden und von Patienten mit Herzinfarkt, akuter lymphatischer Leukämie (ALL) und akuter myeloischer Leukämie (AML) benutzt. Deproteinisierung erfolgte mittels einer einfachen Ultrafiltrationstechnik. Dehydroascorbinsäure wurde nach Reduktion mit Dithiothreitol als Ascorbinsäure bestimmt. Die benutzte Methode erlaubt auch die Bestimmung des Stereoisomers Isoascorbinsäure. Der mögliche Einfluß von im Plasma vorkommenden Substanzen auf die Bestimmung des Vitamin C wurde untersucht. Die Ergebnisse zeigen eine drastische Abnahme der Gesamt-Vitamin C-Konzentration in Plasma und Erythrocyten mit einer parallelen Zunahme der relativen DHA-Konzentration in AML-Patienten. In ALL-Patienten sind sowohl die Gesamt-Vitamin C- als auch die relative DHA-Konzentrationen erhöht.

Summary

High-performance liquid chromatography with UV-detection at 254 nm was used for determining ascorbic acid, dehydroascorbic acid, and isoascorbic acid in plasma and erythrocytes obtained from healthy volunteers and from patients with coronary infarct, acute lymphatic leukemia (ALL), and acute myeloic leukemia (AML). Deproteinisation was done by a simple ultrafiltration technique. Dehydroascorbic acid (DHA) was determined after reduction to ascorbic acid with dithiothreitol. The separation system chosen allows the search for the stereoisomer isoascorbic acid. To exclude interfering substances which could coelute with ascorbic or isoascorbic acid, several other compounds present in plasma were investigated including e.g. the aromatic amino acids, glutathione, cysteine, and uric acid. The results reveal a drastic decrease in total vitamin C concentration in plasma and erythrocytes with a concomitant increase in rel. DHA concentration in patients with AML. In ALL patients, both the total vitamin C and rel. DHA concentrations were increased.