Abstract
Estimation procedures for inhibitors of the proteinases trypsin, chymotrypsin, plasmin (fibrinolysin), thrombin and kallikreins in extracts of organs and body fluids are discussed. Best results are obtained with synthetic substrates, e.g. N-benzoyl-arginine-p-nitroanilide (for trypsin), N-(3-carboxypropionyl)-l-phenylalanine-p-nitroanilide (for chymotrypsin) and N-benzoyl-argininethylester (for plasmin, thrombin, kallikreins). Water-insoluble resins (copolymers of ethylene and maleic acid) of proteinases are very suitable for the specific isolation of proteinase inhibitors from crude extracts of plants and organs. Inhibitors of relative low molecular weight (near 6,000) are bound in neutral buffer solutions in complex form to the proteinase, which is covalently fixed to the polyanionic carrier. Inhibitors of high molecular weights and low isoelectric points (below 6) are bound only to the fixed proteinase if the polyanionic character of the resin is “neutralized”. Thus we succeeded in isolating, e.g., inhibitors from soyabeans and egg white. The inhibitors are dissociated from the proteinase resins in acidic salt solutions and in urea or guanidine solutions. Water-insoluble resins of the trypsin-kallikrein inhibitor from beef organs are suitable for the isolation of trypsin, chymotrypsin and kallikreins in a similar manner.
Zusammenfassung
Die Bestimmung von Inhibitoren für die Proteinasen Trypsin, Chymotrypsin, Plasmin, Thrombin und für Kallikreine in Gewebsextrakten und Körperflüssigkeiten wird diskutiert. Mit Hilfe wasserunlöslicher Proteinaseharze lassen sich Inhibitoren dieser Enzyme auf einfache und spezifische Weise aus den Extrakten isolieren. Die Aminosäurezusammensetzung der aus Pankreas von Rind, Schwein und Hund isolierten spezifischen Trypsininhibitoren wird angegeben. In ähnlicher Weise eignen sich auch wasserunlösliche Inhibitorharze zur Isolierung von Enzymen und zur einfachen Trennung von Proteinasegemischen.
Similar content being viewed by others
Literatur
Anderer, F. A.: Z. Naturforsch. 206, 499 (1965); vgl. [29].
Anderer, F. A., u. S. Hörnle: Z. Naturforsch. 206, 457 (1965).
Bieth, J., P. Métais, and J. Warter: Ann Biol. Clin. 24, 787 (1966).
— — —: Ann. Biol. Clin. 26, 143 (1968).
Cerwinsky, E. W., P. J. Burck, and E. L. Grinnan: Biochemistry 6, 3175 (1967).
Erlanger, B. F., and N. Kokowsky: Arch. Biochem. Biophys. 95, 271 (1961).
Frey, E. K., H. Kraut u. E. Werle: Kallikrein-Padutin. Stuttgart: F. Enke 1950.
Frey, E. K., H. Kraut u. E. Werle: Das Kallikrein-Kinin-System und seine Inhibitoren. Stuttgart: Enke 1968.
Fritz, H.: Habilitationsschrift, I. Med. Fakultät der Univ. München, 1968.
- B. Brey, M. Gebhardt u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. (in Vorbereitung).
Fritz, H., G. Hartwich u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 345, 150 (1966).
—, I. Hüller, M. Wiedemann u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 348, 405 (1967).
—, M. Hutzel, I. Hüller, M. Wiedemann, H. Stahlheber, P. Lehnert u. M.-M. Forell: Z. Physiol. Chem. 348, 1575 (1967).
— —, u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 348, 950 (1967).
— —, M. Hutzel, M. Wiedemann u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 348, 308 (1967).
—, H. Schult, M. Neudecker u. E. Werle: Angew. Chem. 78, 775 (1966).
—: Angew. Chem. Internat. Edit. 5, 735 (1966).
—, I. Trautschold, H. Haendle u. E. Werle: In: Chemistry, pharmacology and clinical applications of proteinase inhibitors, Conference of the New York Academy of Sciences, New York City Sept. 12.–13., 1966. Ann. New York Acad. Sciences 146, 400 (1968).
—, F. Woitinas u. E. Werle; Z. Physiol. Chem. 345, 168 (1966).
Greene, L. J., D. S. Fackre, and M. Rigbi: Federat. Proc. 25, 3405 (1966).
Greene, L. J., M. Rigbi, and D. S. Fackre: J. Biol. Chem. 241, 5610 (1966).
Haendle, H., H. Fritz, I. Trautschold u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 343, 185 (1965).
—, H. Ziegler u. E. Werle: in Vorbereitung; vgl. [15].In:.
Haverback, B. J., B. Dyce, H. Bundy, and H. A. Edmondson: Am. J. Med. 29, 424 (1960).
Hochstrasser, K., M. Muss u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 348, 1337 (1967).
Kassell, B., M. Radicevic, S. Berlow, R. J. Peanasky, and M. Laskowski: J. Biol. Chem. 238, 3274 (1963).
Levin, Y., M. Pecht, L. Goldstein, and E. Katchalski: Biochemistry 3, 1905 (1964).
Nagel, W., F. Willig, W. Peschke u. F. H. Schmidt: Z. Physiol. Chem. 340, 1 (1965).
Trautschold, I.: Habilitationsschrift, Med. Fakultät der Univ. München, 1965.
Trautschold, I., H. Fritz u. E. Werle: In: Hypotensive Peptides, p. 221. New York: Springer 1966.
—, u. E. Werle: Z. Physiol. Chem. 325, 48 (1961).
Tschesche, H.: Z. Physiol. Chem. 348, 1216 (1967).
Tuppy, H., U. Wiesbauer u. E. Wintersberger: Z. Physiol. Chem. 329, 287 (1962).
Vogel, R., I. Trautschold u. E. Werle: Natürliche Proteinasen-Inhibitoren. Stuttgart: G. Thieme 1967.
Author information
Authors and Affiliations
Rights and permissions
About this article
Cite this article
Fritz, H., Hochstrasser, K. & Werle, E. Nachweis und präparative Trennung von Proteinaseinhibitoren und von Proteinasen mit Hilfe wasserunlöslicher Enzym- bzw. Inhibitorharze. Z. Anal. Chem. 243, 452–463 (1968). https://doi.org/10.1007/BF00530725
Received:
Issue Date:
DOI: https://doi.org/10.1007/BF00530725