ISSN:
1432-072X
Source:
Springer Online Journal Archives 1860-2000
Topics:
Biology
Description / Table of Contents:
Zusammenfassung Die Tyrosinase der Mutantezonata (z) vonPodospora anserina wurde untersucht. Die Mutante erzeugt im Vergleich zum Wildstamm große Mengen Tyrosinase.z ist eine morphologische Mutante mit rhythmischen Wuchs. Das Genz liegt auf dem rechten Arm der Koppelungsgruppe II und hat einen Abstand von 46 Kartierungseinheiten vom Centromer. Die Reinigung des Enzyms erfolgte durch Präzipitation mit Protaminsulfat, Ammoniumsulfat und anschließende Säulenchromatographie an DEAE-Sephadex und Hydroxylapatit. Die Einheitlichkeit des gereinigten Enzyms wurde in der Ultrazentrifuge und der Elektrophorese festgestellt. Das gereinigte Enzym ist in verdünnter Lösung instabil. Im Konzentrationsbereich von 2–15 mg/ml hat die Tyrosinase eine Sedimentationskonstante vons 20,w 0 =6,04. Die Molekulargewichtsbestimmung aus Diffusion und Sedimentation und aus dem Sedimentationsgleichgewicht nachYphantis ergab in demselben Konzentrationsbereich ein Molekulargewicht um 100.000. Bei einer Enzymkonzentration von 0,04 mg/ml fanden wir mit der Gelfiltrations-methode nur ein Molekulargewicht von 42.000. Aus diesen Resultaten läßt sich in Übereinstimmung mit den Ergebnissen an anderen Tyrosinasen aus Pilzen eine konzentrationsabhängige Assoziation und Dissoziation des Enzyms folgern. Der Kupfergehalt beträgt 0,214±0,008%. Das gereinigte Enzym hat ein Absorptionsmaximum bei 280 nm und eine Schulter bei 290 nm und von 320 bis 380 nm. Das Verhältnis von Dehydrogenierungen an Brenzcatechin zu Hydroxylierungen an Hydrochinon konnte polarographisch bestimmt werden. Es läuft im Mittel auf zwei Dehydrogenierungen nur eine Hydroxylierung ab. Natriumazid wirkt als reversibler und kompetitiver Inhibitor der Dehydrogenierungsreaktion. Im Rohextrakt liegt das Enzym in einer latenten Form vor. Es sind nur 10–20% der späteren Aktivität nachzuweisen. Das Enzym wird im Verlauf der Reinigungsprozedur oder durch Temperaturbehandlung (10 min bei 60°C) aktiviert. Der Aktivierungsvorgang ist von einer Veränderung der elektrophoretischen Beweglichkeit des Enzyms begleitet. Latentes und aktives Enzym unterscheiden sich nicht in ihrem Sedimentationsverhalten.
Notes:
Summary Tyrosinase of the mutantzonata (z) ofPodospora anserina was investigated. In comparison to the wild strain the mutant (z) produces large quantities of tyrosinase.z is a morphological mutant with rhythmic growth. The genez is localized on the right arm of linkage group II at a distance of 46 map-units from the centromere. The enzyme was purified by precipitation with protamine-sulphate and ammonium sulphate and by subsequent column-chromatography on DEAE-Sephadex and hydroxylapatite. The homogeneity of the purified enzyme was checked by ultracentrifugation and disc-electrophoresis. The purified enzyme is unstable in dilute solution. At a concentration of 2–15 mg/ml the tyrosinase has a sedimentation constant ofs 20,w 0 =6.04. The determination of molecular weight from sedimentation and diffusion constants and from sedimentation-equilibrium according toYphantis showed a molecular weight of approximately 100,000 in the same concentration range. At an enzyme concentration of 0.04 mg/ml we found a molecular weight of only 42,000 using the gel-filtration technique. From these results, in accordance with the results obtained from other tyrosinases in fungi, association and dissociation of the enzyme dependent on concentration may be concluded. The copper content reaches a level of 0.214±0.008%. The purified enzyme has an absorption maximum at 280 nm and a shoulder at 290 nm and from 320 to 380 nm. The quotient of catechol-dehydrogenations to hydroquinone-hydroxylation was determined polarographically. The mean ratio is two dehydrogenations to only one hydroxylation. Sodium azide acts as a reversible and competitive inhibitor of the dehydrogenation-reaction. In the crude extract the enzyme is found in a latent form. Only 10–20% of its later activity can be demonstrated. The enzyme is activated in the course of the purification procedure or by temperature treatment (10 min at 60°C). The activation process is accompanied by a change in the electrophoretic mobility of the enzyme. Latent enzyme and active enzyme do not differ in their sedimentation behaviour.
Type of Medium:
Electronic Resource
URL:
http://dx.doi.org/10.1007/BF00693317
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